重組蛋白復(fù)溶與保存如何操作？
1）凍干粉在運(yùn)輸過(guò)程中，會(huì)因?yàn)橥饬Φ囊蛩卣掣接诠鼙诨蛘吖苌w上面，在開(kāi)蓋之前，先通過(guò)離心操作，將凍干粉收集于管底，避免損失很浪費(fèi)。開(kāi)蓋前快速離心10000-12000rpm，30s；若沒(méi)有高速離心機(jī)，3000-3500rpm 離心5min。
2）離心之后，向凍干粉中加入提供的復(fù)溶Buffer，用槍頭輕輕吹打混勻，重懸至濃度不低于100 μg/mL。注：分裝凍存時(shí)，蛋白濃度不低于 100 ug/mL，且每管的體積不可小于20 μL。
3）用復(fù)溶Buffer直接溶解的細(xì)胞因子或重組蛋白液體可在 2-8℃ 最長(zhǎng)保存1周。對(duì)于周期較短的實(shí)驗(yàn)，可以直接取該條件下保存的重組蛋白溶液加入到培養(yǎng)體系內(nèi)即可，待一周之內(nèi)用完。若要長(zhǎng)期保存，則需用含載體蛋白 (0.1% BSA、5% HAS、10% FBS 或 5% 海藻糖) 的溶液進(jìn)一步稀釋?zhuān)缓蠓盅b凍存于 -20℃ 至 -80℃。
4）保存產(chǎn)品時(shí)請(qǐng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會(huì)破壞重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了蛋白的降解速度。